Cónyuges/Hijos(as):: Isabel de Avis
Carlos se casó con Isabel de Avis, hija de Manuel I de Portugal y María de Aragón y Castilla, el 11 Mar 1526 en Sevilla. (Isabel de Avis nació el 24 Oct 1503 en Lisboa (Portugal) y falleció el 1 May 1539 en Toledo.)